【培養前準備】

在（zài）開（kāi）始實驗前要製（zhì）定好實驗計劃和（hé）操作程序。有關數據的計（jì）算要事先做好。根（gēn）據實驗（yàn）要求，準備各種所需器材和物品、清點無誤後將其放置（zhì）操作場所（培養室、超淨台）內，然後開始消毒。這可以避免開始實驗後．囚物品不全往返拿（ná）取而增（zēng）加汙染機（jī）會。

【操作野消毒】

無菌培養室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地麵—次（拖布要專用）．紫外線照射消毒30-50min，超淨工（gōng）作台台（tái）麵每次實驗前要用75％酒精擦洗。然後紫外線淌毒30min。在工作台（tái）麵消毒時切勿將培養細胞和（hé）培養用液同（tóng）時照射紫外線，消（xiāo）毒時工作台麵上用品不要過多（duō）或重疊放置．否則會遮擋射線降（jiàng）低消毒效果。—些操作用具如移液（yè）器、廢（fèi）液缸、汙物盒、試管架等用75%酒精擦洗後置於台內同時（shí）紫外線消毒。

體外（wài）培養細胞缺乏抗感染能力，所以防止（zhǐ）汙染是決定培養成功或失敗（bài）的首要條件。即便使用設備完善的（de）實驗室。若實驗者粗心大意，技術操作不（bú）規範,也會導致汙染。因而．為在一切操作（zuò）中為最大可能的（de）保證（zhèng）無菌．每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。

【洗手和著裝】

原則上（shàng）和外科手術相同。平（píng）時僅做觀察不做培養操（cāo）作時，可穿裝細胞培養（yǎng）室內紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超淨台工作時，因整個前臂要伸入箱內，應著長袖（xiù）的清（qīng）潔（jié）工作（zuò）服，並於開始操作前要用75％酒精消毒手。如果實驗過（guò）程中手觸及可能汙染的物品和出入培養（yǎng）室都（dōu）要重新用消毒液洗（xǐ）手。進入原代培養室需徹底洗手還（hái）要戴口罩、著消毒衣帽。

【火焰消毒】

在無菌環境進行培養或做其它無菌工作時（shí），首先要點燃（rán）酒精燈或（huò）煤氣燈（dēng）。以後一切操作，如（rú）按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處並經過燒灼進行。但要注意：金屬器械不（bú）能在為焰（yàn）中燒的時間過（guò）長，以防退火，燒過的金（jīn）屬（shǔ）鑷要待冷卻（què）後才能挾取組織，以免造成組織（zhī）損傷。吸取（qǔ）過營養液後的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留（liú）在吸管頭中營養液能燒焦形成炭膜，再用時會把有害物帶入營養液（yè）中（zhōng）。開（kāi）啟、關閉長有細（xì）胞的培養瓶時，火焰滅菌時間要短。防止（zhǐ）因（yīn）溫度過高燒死細胞。另（lìng）外膠塞過火焰時也（yě）不能時間長，以免燒焦產生有毒氣體，危害（hài）培養細胞。

【操作】

進行（háng）培養時，動作要準確敏捷，但又不必（bì）太快，以防空氣流動，增加汙染機會。不能用手觸及已消毒（dú）器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便，工（gōng）作台麵上（shàng）的用品要（yào）有合理的布局，原則上應是右手使用的（de）東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置於中央。工作由始至（zhì）終要保持一定順序性（xìng），組織或細胞在未做處理之前，勿過早暴（bào）露在空氣（qì）中。同樣，培養液在未用（yòng）前，不要過早開瓶；用過之後如不（bú）再重複使用，應立即封閉瓶（píng）口直立可增加落菌機會。吸取營養液、PBS、細胞懸液及其它各種用液時，均應（yīng）分別使用吸（xī）管，不能混用，以防擴大汙染或導致細胞交叉汙染。工作中不能麵向操作野講話或咳嗽，以（yǐ）免唾沫把（bǎ）細菌或支原體帶入工作台麵發（fā）生汙染。操作（zuò）前（qián）用酒精擦拭超淨台麵及雙手。手或相對較髒的物品（pǐn）不能經過開放的瓶口上方，瓶口最易汙染，加液時如吸管尖碰到瓶（píng）口，則應將吸管丟掉。

本文關鍵詞：無菌操作的注意事項（xiàng）