範圍

本標準規定了水產品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的液相色譜測（cè）定方法。

本標準適用（yòng）於水（shuǐ）產品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶（dìng）和磺胺甲基異噁唑殘留量的測定，其它磺胺類藥物的測定可以參照（zhào）本標準。

規範性引用文件（jiàn）

下列文（wén）件中的條款通過本標準的引用（yòng）而成為（wéi）本標準的條款。凡是注日期的引（yǐn）用文件，其隨後（hòu）所有的（de）修（xiū）改單（dān）(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用於本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協（xié）議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用（yòng）文（wén）件，其（qí）最新版本適用於本標準。

GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法（fǎ）

原理（lǐ）

用乙酸乙酯提（tí）取，稀鹽酸反提取，正己烷脫脂，熒光（guāng）胺衍生，反相色譜（pǔ）柱分離，熒光檢測器檢測，磺胺5-甲氧嘧啶為內標物，內標法定量。

試劑

本標（biāo）準所用試劑在磺胺類藥物出峰處應無幹擾峰，實驗用水應（yīng）符合（hé）GB/T6682中一級水標準。

標準（zhǔn）品：磺胺嘧啶、磺胺甲（jiǎ）基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲（jiǎ）基（jī）異噁唑，磺胺（àn）5-甲氧嘧啶，純度均大於98.0%。

丙酮：色譜純。

正己（jǐ）烷：色譜純。

乙酸乙酯（zhǐ）：色譜純（chún）。

乙（yǐ）腈：色譜純。

甲醇：色譜純。

熒光胺：純度（dù）大於99.0%。

乙酸鈉：分析純。

冰（bīng）乙酸：優級純。

鹽酸溶液：2mol/L，量取180mL鹽酸，加適量水並稀釋至1000mL。

乙酸鈉溶液：3.5mol/L，稱取28.7g無（wú）水乙酸鈉溶於蒸餾水中，定容至100mL。

熒光胺溶液：2mg/L，稱取0.03g熒光胺，加15mL丙酮（tóng），振（zhèn）搖（yáo）至完全溶解，存放在暗處。現配現用。

標準儲備液：100mg/L，稱取標準（zhǔn）品10mg(稱準至0.1mg)，用甲醇溶解（jiě）並定容至100mL。避光冷藏保存，保存期為一個月。

混合標準中間液：1mg/L，移取標準儲備液（yè）各1.00mL，用甲（jiǎ）醇稀釋並定容至100mL，在（zài）室溫下混勻。

內標儲備液：100mg/L，稱取（qǔ）磺胺5-甲氧嘧啶標準品10mg(稱準至（zhì）0.1mg)，用甲醇溶解並定容至100mL。避光冷藏保存，保存期為一個月。

內（nèi）標中間液：1mg/L，移取內標儲備（bèi）液1.00mL，用甲醇稀釋並定容至100mL，在室溫下混勻。

混合標準使用液（yè）：取混（hún）合標準（zhǔn）中間液20μL、40μL、100μL、200μL、400μL，分（fèn）別（bié）加入內標（biāo）中間液100μL，用2mol/L鹽酸(4.10)稀釋至2mL，配成濃度（dù）分別為0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L的混（hún）合（hé）標準使用液（yè），其中內標（biāo）濃度為0.05mg/L。

儀器（qì）與設備

液相色譜（pǔ）儀：配熒光檢測器。

電子天（tiān）平：感量0.0001g。

電子天平：感量0.01g。

高速組織搗碎機。

均質機。

離心機。

旋渦混勻器。

氮吹儀。

往複式振蕩（dàng）器。

聚丙烯離心管：15mL、50mL。

容量瓶：10mL、20mL、50mL、100mL、200mL、500mL、1000mL。

玻璃移液管：1mL、2mL、5mL、10mL。

巴斯德吸管。

色譜條件（jiàn）

色譜柱：ODS-C18，5μm，4.6mm×250mm，或同類型號色譜柱。

柱（zhù）溫：45℃。

流動（dòng）相：乙腈（jīng） 乙酸溶液(38 62)，500mL水中加入冰乙酸調節（jiē）pH至3.0配（pèi）製（zhì）成乙（yǐ）酸（suān）溶液。

流速：1mL/min

進樣量：20μL。

激發波長：405nm。

發射波長：495nm。

步驟分析

樣品製備

從原始樣品中取出部分有代表性的樣品，高速組織搗碎機搗碎。四分法縮分出不少於500g樣品，混勻，均分成兩份。裝入清潔容器（qì），加封，標明（míng）標記。-18℃以下冷凍（dòng）保存。

提取

將樣品解凍，稱取2.00g，置於50mL聚丙烯離心（xīn）管，加入磺胺5-甲氧嘧啶標準中（zhōng）間液（yè）(4.16)100μL，用玻璃棒攪勻，再（zài）加乙酸（suān）乙酯10mL，均質機14000rpm均質（zhì）1min，往複式振蕩器振動10min，3000rpm離心10min，將乙酸（suān）乙酯層小心轉移（yí）到15mL具塞刻度試管中，40℃以下氮氣吹（chuī）至2mL。再向原離心管中（zhōng）加入乙酸乙酯10mL，旋渦混勻30s，振動10min，3000rpm離心10min，將乙酸乙（yǐ）酯層小心轉移到原（yuán）15mL具塞刻度試（shì）管中，40℃以下氮（dàn）氣吹至5mL。然後在試（shì）管中加入2.00mL2mol/L的鹽酸溶液，旋渦混勻1min，加蓋後振動（dòng）10min，3000rpm離心8min，用（yòng）巴斯（sī）德吸管移去（qù）乙酸（suān）乙酯層，在餘液中加入（rù）正己烷5mL，旋渦混勻30s，3000rpm離心8min，用巴斯德（dé）吸（xī）管移去正己（jǐ）烷層，0.45μm微孔濾膜過濾，濾液備用。

衍生

向樣品瓶中加入200μL混合標準使用液或樣品提取液、200μL乙酸鈉溶液和80μL熒光胺溶液，旋渦混勻30s，20min後供液相（xiàng）色譜分析。

色譜分析

取衍生後的樣品提取液20μL進樣，記錄峰麵積，響應值均應在儀器檢測的線性範圍之內。根據標準樣品的保（bǎo）留時間定性，內標法定量。磺胺類藥物色譜分析圖（tú）參見附錄（lù）A。

工作曲線

稱（chēng）取空白樣品2.00g，分別添（tiān）加混合標準中間液(4.14)20μL、40μL、100μL、200μL、400μL，樣品中每種磺胺殘留（liú）量分別為0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20mg/kg，按7.2、7.3、7.4操作，以磺胺峰麵積與內標物峰（fēng）麵積的比（bǐ）值為縱坐標，磺（huáng）胺含量為橫坐（zuò）標，繪製工作曲（qǔ）線。

計算（suàn）

用（yòng）色譜數據處（chù）理軟件或按下式（shì）計算（suàn）樣品（pǐn）中磺胺殘留量：

式中：

X——樣品中磺胺殘留量，單位為毫克（kè）每千克(mg/kg)；

s——樣品溶液中磺（huáng）胺峰麵積，單位為counts；

s1——樣品溶液中內（nèi）標峰麵積，單位為counts；

S——標準溶液中磺胺峰麵積，單位為counts；

S1——標準溶液中內標峰麵積（jī），單位為counts；

x——加標樣品中磺胺殘留（liú）量，單位為（wéi）毫克（kè）每千克（kè）(mg/kg)。

方法回收率

濃度範圍為0.010mg/kg～0.10mg/kg時，回收率見回收（shōu）率表。

回收（shōu）率表

名稱

回收率

磺胺嘧啶

88.0%～111.8%

磺胺甲基嘧啶

90.0%～110.8%

磺胺二甲基嘧啶

91.0%～110.1%

磺胺甲（jiǎ）基異噁（wù）唑

107.0%～116.7%

方法檢出限

本方法檢出限為0.010mg/kg。

精密度（dù）

在重複性條（tiáo）件下獲得（dé）的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。

本文關鍵詞：應用液相色譜法測定水產中的磺（huáng）胺含量