【操作】

進行培養時，動作要準確敏（mǐn）捷，但又不必太快，以防（fáng）空氣流（liú）動，增加汙（wū）染機會。不能用手觸及已消毒器（qì）皿，如已接觸（chù），要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方（fāng）便，工作台麵（miàn）上的用品要有合理的布局，原則（zé）上（shàng）應是右手使用的東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置於中央。工作由始至終要（yào）保持一定順序性，組織或細胞在未做（zuò）處理之前（qián），勿過早暴露（lù）在（zài）空（kōng）氣中。同樣，培養液在（zài）未用前，不要過早開瓶；用過之後如不再重複使用，應立即封閉瓶口直（zhí）立可增加落菌機會。吸取營養（yǎng）液、PBS、細胞懸液及其它各（gè）種（zhǒng）用液時，均應分（fèn）別使用吸管，不能混用，以（yǐ）防擴大汙染或導致細（xì）胞交叉汙染。工作中不能麵向操作野講（jiǎng）話或咳嗽，以免唾沫把細菌或支原體帶入工作台（tái）麵發生汙（wū）染。操作前用酒精擦拭超淨台麵及雙手（shǒu）。手或（huò）相（xiàng）對較髒的物品不能經過開放的瓶口上方，瓶口最易汙染，加液時如吸管（guǎn）尖碰到（dào）瓶口，則應將吸管丟掉。

【培養前準備】

在開始實驗前要製定好實驗計劃和操作程序。有（yǒu）關（guān）數據（jù）的計算要事先做好。根據實驗要求，準備各種所需器材和物品、清點無誤後將其放置操作場所（培養室、超淨台）內，然後開始消毒。這可以（yǐ）避免開始實驗後．囚物品不全往返拿取而增加汙染（rǎn）機會（huì）。

【操作野消毒】

無菌培養室每天（tiān）都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地麵—次（拖布要專用）．紫外線照（zhào）射消毒30-50min，超（chāo）淨工作台台（tái）麵每次實驗前要用75％酒精擦洗。然後紫外線淌毒30min。在工（gōng）作台麵消毒時切（qiē）勿將培養細胞和培養用液同時照射紫外線，消毒時工作台麵上（shàng）用（yòng）品不要過（guò）多或重疊放置．否則會遮擋射線降低消毒效果。—些操作用具如移液（yè）器、廢液（yè）缸（gāng）、汙（wū）物盒、試管架等用75%酒精擦洗後置於台內同時紫外線消毒。

體外培養細胞缺乏抗感染能力，所以（yǐ）防（fáng）止汙染是決定培養成功或失敗的首（shǒu）要條件。即（jí）便使用設備完善的實驗室。若實驗者粗心大意，技術操作不規範,也會導（dǎo）致汙染。因而．為在一切操作中為最大可能的保證無（wú）菌．每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。

【洗手和著裝】

原則上和外科手術（shù）相同。平時僅做觀察不做培養操作時，可（kě）穿裝細胞培（péi）養室內紫外線照射（shè）30min的（de）清潔工作服。在利用超淨台工作時，因整（zhěng）個前臂要伸入箱內，應著長袖的清潔工作服，並於開（kāi）始操作前要用75％酒精消毒手。如果實驗（yàn）過程中手觸及可能汙染的物品和出入培（péi）養室都要重新用（yòng）消毒（dú）液洗手。進入原代（dài）培（péi）養室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。

【火焰（yàn）消毒】

在無菌環境進行培養或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈或煤氣燈。以後一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶（píng）口等，都需在火焰近處並（bìng）經過燒灼進行。但要注意：金屬器械不能在為（wéi）焰中（zhōng）燒（shāo）的時間過長，以防退火，燒過（guò）的金屬鑷要待冷（lěng）卻後才能挾取組織（zhī），以免造（zào）成組織損傷。吸取（qǔ）過營養液後的吸管（guǎn）不（bú）能再用火焰燒灼，因殘留在吸管（guǎn）頭中營養液（yè）能燒焦形成炭膜，再用時會把有害物帶入營養液中。開啟、關閉長有細胞的培養瓶時，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細胞。另（lìng）外膠塞過火焰時也（yě）不能時間（jiān）長，以免燒焦產（chǎn）生有（yǒu）毒氣（qì）體，危害培養細胞。

本文關鍵詞（cí）：無菌操作注意事項（xiàng）