ELISA試驗（yàn）以靈敏（mǐn）度較高、特異性較好（hǎo）的特點在臨床上得到了（le）廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測（cè）效果影響較大，如（rú）不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我（wǒ）將操作中各個環節（jiē）常出現問題的（de）原因及解決辦法（fǎ）總結於下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。

下麵分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，並給出相應的解決辦法

1 選擇試劑 選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作（zuò）前將試（shì）劑在室溫下平衡（héng）30-60分鍾。

2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不（bú）好即進行加樣（yàng）； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣（yàng）後（hòu）放（fàng）入孵箱前等待時（shí）間過（guò）長（特別是室內（nèi）溫度較高時）； 3）加完標本再加酶試（shì）劑時酶濺出孔外（wài）。解決（jué）辦法： 1） 標本為血（xuè）清：最好將血液先自然存（cún）放1-2小時後，再用3000rmp離心15分鍾；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本（běn）收集管，采血後必須立即顛（diān）倒采血管混合5-10次，放置一段時（shí）間後，3000rpm離心15分鍾；若在幾天內檢測（cè），可放在2-8℃冰箱中，若要（yào）貯存，則置於-20℃的低溫冰箱內。 2） 加樣後（hòu）及（jí）時放入孵（fū）箱。 3） 加酶試劑後用吸水紙在酶標板表麵輕拭吸幹。 4） 如果采用AT或其他全自動加（jiā）樣，最好選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑。 5） 標本較多時（shí），請分批操作。

3 孵育（yù） 可能原因： 1） 孵育時未（wèi）貼封片或加蓋（gài），使（shǐ）標本或稀（xī）釋（shì）液蒸發，吸附於孔壁，難於清洗徹底； 2） 孵育時（shí）間（jiān）人（rén）為延長，導致（zhì）非特異性結合緊附於反應孔周圍，難（nán）以清洗徹底。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋； 2） 按說明步驟嚴格控製操作時間（jiān）。

4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔（kǒng）之間液體交叉。 2） 采用半（bàn）自動洗板機洗板（bǎn）時，洗液量不足，導致洗板不（bú）徹底；洗板針（zhēn）堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致（zhì）洗板效果差（chà）。 3） 反應板過多造成洗板（bǎn）等待時間長。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後最好在吸水紙（選（xuǎn）擇幹淨、無或少塵的吸水材料）上輕輕（qīng）拍幹； 2） 合理安排，或多用幾台洗板機。

5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑（jì）配製後放置時間過長（zhǎng）或使用過（guò）期顯色劑； 2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回（huí）流。解（jiě）決辦（bàn）法： 1） 顯色劑盡量（liàng）在臨用前配製，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時保持顯色劑不外流； 3） A、B液應（yīng）避免（miǎn）接觸金屬器械。

6 終止 可能原（yuán）因如加終止液（yè）時產生較多（duō）氣泡（pào），導致假陽性增加。所以（yǐ）在加終止（zhǐ）液時應（yīng）避免產生氣（qì）泡。

7 讀（dú）板 如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。

所以在整個操作過程（chéng）中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高（gāo）檢測質量。

在（zài）實（shí）際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本（běn），才能保證檢測質量。現在國內已有（yǒu）相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對於實現ELISA標準化檢測、提高檢（jiǎn）測質量起到了重要（yào）作用。

本文（wén）關鍵詞：ELISA中常見問題及解決方法