1、實驗（yàn）原理:

(1)、細菌生（shēng）化試驗:

各種細菌所具有的酶係統不（bú）盡（jìn）相同,對營養基質的分解能力也不一樣,因而代謝產（chǎn）物或多或少（shǎo）地各有區別,可（kě）供鑒別細菌之用.用（yòng）生化試驗的方法檢測細菌對各種基質的代謝作用及其代謝產物,從而鑒別細菌的種屬,稱之為細菌的生化反應.

(2)、糖（táng）(醇)類發酵試驗:

不同的細菌（jun1）含（hán）有發酵不同糖(醇)的酶,因（yīn）而發酵糖(醇)的能力各不相同.其產生的代（dài）謝產物亦不相同,如（rú）有的產酸（suān）產氣,有的產酸不產氣.酸的產生可利用指示劑來判定.在配製培養基時預先加入溟（míng）甲酚紫［P HS. 2(黃色)一6 . 8 (紫色)],當發酵（jiào）產酸時,可使培養基由紫色（sè）變為黃（huáng）色.氣體產（chǎn）生可由發酵（jiào）管中倒置的杜氏小（xiǎo）管中（zhōng）有（yǒu）無氣泡來證明.

(3)、甲基紅(Methylred)試驗(該試驗簡稱MR試驗):

很多細菌（jun1）,如大腸杆菌等分（fèn）解葡萄糖產（chǎn）生丙酮酸,丙（bǐng）酮酸再被分解,產生甲酸、乙酸、乳酸等,使培養基的pH 降低（dī）到4 . 2 以下,這時若（ruò）加甲（jiǎ）基紅指示劑呈現（xiàn）紅色.因甲基紅指示（shì）劑變色範圍是pH4 . 4 (紅色)一pH6 . 2 (黃色（sè）).若某些細菌如（rú）產（chǎn）氣杆菌,分解葡（pú）萄糖產生丙酮酸,但很快將（jiāng）丙酮酸脫梭（suō）,轉（zhuǎn）化（huà）成醇等物,則（zé）培養基的pH 仍在6 . 2 以上,故此時加入甲基紅指示劑,呈現（xiàn）黃色.

(4)、大分子物質代謝實驗:

靛（diàn）基質(口引睬)試驗:

某些細菌,如大腸（cháng）杆菌,能（néng）分（fèn）解蛋白質中的色（sè）氨酸（suān）,產生靛基質(叫睬),靛基質與對二甲基氨基苯甲醛結合,形成玫瑰色靛基質(紅色化合物).

硫化（huà）氫試驗:

某些細菌能分解含硫的氨基酸(肌氨酸、半肌氨酸等（děng）),產生硫（liú）化氫,硫化氫與培（péi）養基中的鉛鹽或鐵鹽,形成黑色沉澱硫化鉛或硫化鐵.為硫化氫（qīng）試驗陽性,可借（jiè）以鑒別細菌.

明膠液化實驗:

某些細菌（jun1）具有膠原酶,使（shǐ）明膠被分解,失（shī）去（qù）凝固能力,呈現液體狀態,是為陽性.

粉水解（jiě）試驗(在紫外誘變中做（zuò）,本實驗不（bú）做):

細菌對大分（fèn）子的澱粉不能直接利用,須靠產生的胞（bāo）外酶(澱粉酶)將澱粉水解為小分子糊精或進一步水解為（wéi）葡萄糖(或（huò）麥芽糖),再（zài）被（bèi）細菌吸收利用,細菌（jun1）水解澱粉的過程可通過底物的變化來證明（míng）,即用碘測定不再產生藍色.

(5)、有機酸（suān）鹽及氨鹽利用試（shì）驗（yàn）:

檸檬酸鹽利用試驗:

檸（níng）檬酸鹽培養基係一綜合性培養基（jī）,其中（zhōng）檸檬酸鈉（nà）為碳的唯一來源.而磷酸（suān）二氫按是氮的（de）唯（wéi）一來源.有的細菌如產氣杆菌,能（néng）利用檸檬酸鈉為碳源,因此能在檸檬（méng）酸鹽（yán）培養基上生長,並（bìng）分解（jiě）檸檬酸鹽後產生碳酸鹽,使培養基變為堿性.此時培養基中的溟廖香（xiāng）草酚藍（lán）指示劑由綠色變為深藍色.不（bú）能利用檸檬酸（suān）鹽為碳源的（de）細（xì）菌,在該培養基上（shàng）不生長,培養（yǎng）基不變色.

2、實驗儀器,材料和用具:

(1)實驗儀器:

37℃恒溫培養箱（xiāng）、20℃恒溫（wēn）培養箱(室溫（wēn）代替).

(2)微生物材料:

大（dà）腸杆菌、變形杆菌、枯（kū）草杆（gǎn）菌、產氣杆菌這四種菌種的斜麵各1支.

(3)試劑:

甲基紅試劑、VP試劑、叫噪試劑、格裏斯試（shì）劑(硝（xiāo）酸（suān）鹽利用試驗)、盧戈氏碘液（yè）(澱粉水解（jiě）試驗)

(4)實驗用具:

試管:每份每個試驗2根試驗,1 根（gēn）對照,8個試驗共（gòng）27根.

無菌平皿:每份2個

杜氏小管:每份6個.

接種環、酒精燈、試管架、記號（hào）筆.

(5)培養基:

①葡萄糖發酵培養基和乳糖發（fā）酵培養基:何份各6支試（shì）管,何支5 一（yī）10mi 培養基,滅菌.用於糖類發（fā）酵（jiào）試驗.

②葡萄糖蛋白陳水培養基:每份3 支試管,何支5一10mi培養基,滅菌.用於甲基紅和VP試驗.

③胰蛋白水培養基:每份3支（zhī）何支5一10mi培養基,滅菌.用於叫（jiào）睬試驗.

④檸檬酸鐵錢或醋酸鉛的半固體培養基;每份3 支,每支5 一（yī）10ml 培養基,滅菌（jun1）.用於硫化氫試驗.

⑤營養明膠培養基:每份（fèn）3支（zhī）,每支5一10ml培養（yǎng）基、滅菌.用於明膠液化試驗.

⑥澱粉培養（yǎng）基:每份（fèn）2個平皿,每平皿約20ml培養（yǎng）基,滅菌後倒入平皿.用於澱粉水解試驗.

⑦檸檬酸鈉培養基:每（měi）份3支,每支5 一10ml培養基,滅菌（jun1）,做斜麵.用於檸檬酸鹽利用試驗.

3、實驗步驟:

(1)糖(醇)類發酵試驗（yàn）:

編號在各（gè）試管上分別標明發酵（jiào）培養基名稱,所接（jiē）種的菌名和（hé）組號,下同.

接種取葡萄（táo）糖發酵培養基3支,按編號1 支接（jiē）種（zhǒng）大腸杆菌,另1支接種普通變形杆菌,第3支不接種,作為（wéi）對照C同樣取3支乳糖（táng）發酵培養基,1支接種大腸杆菌,1支接科普通變形杆（gǎn）菌,第（dì）3支不接種,作為對照.

將（jiāng）己接種好的培養基置37℃溫（wēn）箱中培養24h.

觀察結果:被檢細菌若能發酵培養基中的糖時,則使培養基的pH 降（jiàng）低,這時（shí）培養基中的指示劑（jì）呈酸性反應(為黃色),若（ruò）發酵培養（yǎng）基中的糖產酸產氣,則培養基不僅顯酸色反應,並且在培養基中倒置的小玻璃管(杜氏小管)中有氣（qì）體.氣體占整個倒置小玻管的10％以上.若被檢細菌不分解培養（yǎng）基中的糖,則培養（yǎng）基不（bú）發生（shēng）變化.

(2)甲基（jī）紅試驗（yàn）(MR試驗):

將大腸（cháng）杆菌和（hé）產氣杆菌分別接種到葡萄糖蛋白陳水培養基中,37℃培養48h,加甲基紅指示劑數滴（dī）,觀察結果,呈現紅色者為陽性,呈現（xiàn）黃色者為陰性.

(3)伏一普二氏試（shì）驗(VP試驗):

將被檢菌接種到葡萄（táo）糖蛋（dàn）白陳水培養基中（zhōng）,37℃培養48h ,取出,加入40 % KOlls一10滴,然後再加入等量的5％.一（yī）蔡酚溶液,用力（lì）振蕩,再放入37℃溫箱中保溫巧一30min ,以加快反應速度（dù）.若培養物呈現紅色,為伏一普反應陽性（xìng）.

(4)靛基質(口引噪（zào）)試驗:

將（jiāng）被（bèi）檢菌接種到胰（yí）蛋白陳水培養基中（zhōng）,37℃培養24h 一48h 後,沿（yán）試管壁（bì）滴加數滴叫睬試劑於培養物液麵,觀察結（jié）果.

出現紅色者為陽性,出現黃色者為陰性.

(5)硫化氫試驗:

將大腸（cháng）杆菌和變形杆（gǎn）菌以接種針穿刺接種到醋酸鉛或檸檬酸鐵氨培養基中,37℃培養（yǎng）24h ,觀察結果,若有黑色出現者為陽（yáng）性.

(6)明膠液化試驗（yàn）:

取大腸杆菌和枯（kū）草杆菌的純培養物少許,以接種針分別穿刺接種到營養（yǎng）明膠培養基中,置20℃培養（yǎng）5 一7 天.觀察明膠培養基液化情況.若被檢細菌20℃不易生長,可放（fàng）37℃培（péi）養,但在此（cǐ）溫度下明膠培養基呈液狀,故觀察結果時,應將明膠培養基輕輕放入4℃冰箱30min ,此時（shí）明膠（jiāo）又凝（níng）固.若放（fàng）置於冰箱30min仍不凝固者,說明明（míng）膠被（bèi）試驗細菌液（yè）化,是（shì）為陽性.

(7)澱（diàn）粉水解試驗:

將配製好的澱粉（fěn）培養基冷卻到50℃左右,以無菌操作製成平板.

用接種環取少許枯草杆菌劃線接種在平板的一邊,再取（qǔ）少許大腸杆菌（jun1）劃線接種在平板（bǎn）的另一邊.置37℃溫箱培養24h.

將（jiāng）平皿取出,打（dǎ）開皿蓋,滴加少量盧戈氏碘液於平板上,輕輕搖動平皿（mǐn）,使碘液（yè）均（jun1）勻鋪滿（mǎn）整個平板.如菌苔周圍有無色透明圈出現,說明（míng）澱粉己被水解.透明圈的大小,說明該菌水解澱粉能力的大小.

(8)檸檬酸鹽利用試驗:

取少量被檢菌（jun1）接種到檸檬酸鹽培養基上,37℃培養24h後,觀察結果.培養基變深（shēn）藍色者為陽性.培養基不變色,則（zé）繼續培養7天,培養基（jī）仍不變色者為陰性（xìng）.

本文關鍵詞：細菌鑒定中（zhōng）常用的生理生化反應