測定原理：

待測天然含氮有機物與濃（nóng）硫酸共熱時，被氧（yǎng）化成為二氧化碳和水，而氮轉變成（chéng）氨，氨再與硫酸結合生成硫酸銨。為了加速有機物質的分解反應，在消化時常加（jiā）入促進（jìn）劑，硫酸銅可用作催化劑，硫酸鉀或硫酸鈉（nà）可提（tí）高消（xiāo）化液（yè）的沸（fèi）點（diǎn），氧化劑如過氧化氫也能加速反應。

操作方（fāng）法：樣品處理 測（cè）定某一固體樣品中（zhōng）蛋白（bái）質的含量都是按100克物（wù）質的幹重中所含蛋白質的克數來表示。因此在定氮前應先將（jiāng）固體樣（yàng）品中的水分除去。步驟：先將樣（yàng）品（pǐn）磨細，在已（yǐ）稱重的稱量瓶（píng）中稱入一定量樣品，然後置105度（100度無法除去非遊離水）的烘箱內幹燥2小時後（hòu）稱重，以後每1小時再稱重，直至2次稱重數不變為止。

若樣品屬於液體物質，可取一定體積經適當稀釋後，取一定量進行（háng）消化。

消化 根據樣品量的（de）多少（shǎo）選（xuǎn）擇適宜的凱氏（shì）燒瓶4個（此處以50毫升為例），其中2個為（wéi）對（duì）照。向燒瓶內加入準確稱量（liàng）的樣品，注意要把樣（yàng）品加至燒（shāo）瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。另外2個作空白（bái）對照，好對樣品進行校正。

在每個燒瓶中加入約（yuē）300毫（háo）克（kè）硫酸鉀（jiǎ）-硫酸銅混合物（硫酸鉀：五水（shuǐ）硫（liú）酸銅=3：1、6：1或10：1均可），再用量（liàng）筒加入3毫（háo）升濃硫酸。將上述（shù）4個凱氏燒瓶放在通風良好處（最好在通風櫥中進行）加熱消化（huà）。先用小火加熱至沸騰。此（cǐ）時會產生大量泡沫，應特別注（zhù）意（yì）不（bú）能讓（ràng）黑色（sè）物質上升到燒瓶頸部，否則將嚴重影響分析結（jié）果。當混合物停止冒泡，蒸汽與二氧化硫也均勻地放（fàng）出時，將火焰調節到（dào）保持瓶內液體微微沸騰。假若發現瓶頸上有黑（hēi）色（sè）顆粒，應小心（xīn）地將燒瓶傾斜振搖，用消化液（yè）將（jiāng）其洗下。在消化過程中要時常轉動燒瓶，使（shǐ）全部樣品都浸在消化液中。當消化液呈清澈淡藍色時即告消化結束。時間一般在5~6小時！若樣品中含賴氨酸或組（zǔ）氨酸較多時，消化時（shí）間需要延（yán）長1~2倍。因為（wéi）這兩種氨基酸中的氮在短時間內不易消化（huà）完全。

蒸餾 采用改良式凱氏定氮（dàn）儀（yí）。

1、洗滌蒸餾儀：用硼酸指示劑（取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合（hé）指示劑約1毫升，搖勻後呈紫紅色即可；混（hún）合（hé）指示劑：50毫升0.1%甲烯（xī）藍乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇，存於棕色瓶中）檢測是（shì）否清洗幹淨。幹淨標準：指示劑不變色。

2、樣品和空白的蒸（zhēng）餾：取2毫升（shēng）稀釋消化液（yè）至加樣口加入反應室，關（guān）閉加樣口，另取1個裝硼酸指示劑的三角瓶接於冷凝管下端。取30%氫氧化鈉（W/W）溶液（yè）約10毫升，從加（jiā）樣口緩慢加入（rù），當未加完時關閉，並加入約3毫升蒸餾水，再繼續緩慢加入一半後關閉，讓（ràng）剩下的水作液（yè）封。將加（jiā）熱器重新放在蒸汽發生器下（xià）加熱（rè）（注：在清洗儀器完畢後應拿走加熱器），待三角瓶中液體（tǐ）由紫紅變成鮮綠色起開始（shǐ）計時，蒸餾5分鍾，然後移動（dòng）三角瓶使液麵離開冷凝管（guǎn）口約1厘米，並用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周，繼續蒸餾1分鍾。空白同樣。

3、清洗儀（yí）器：同上，不必用指示劑。

滴定 用0.0100mol/L標準鹽酸（要標定，費（fèi）時）滴定三（sān）角瓶中收集的氨，直至硼酸指（zhǐ）示劑由綠變紫紅（hóng）。

注意：蒸餾時（shí）試（shì）驗室環境中切忌有堿（jiǎn）性霧氣，否則要影響分析精度。

本（běn）文關鍵詞：凱（kǎi）式定氮法