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玉（yù）米赤黴（méi）烯（xī）酮免疫親和柱操作說明書
【概要】
玉米赤黴（méi）烯酮(Zearaleaone)又稱F-2毒素（sù），是玉米赤黴菌的代謝產物，具有（yǒu）類雌激素（sù）樣作用，具有較強的（de）生殖毒性和致畸作用，可引起動物發生雌激素亢進症，導致動物不孕或流產（chǎn），對家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業帶來很大的經濟損失。
【適用範圍及性（xìng）能】
用於定性、定量檢測穀物、酒類等食品和飼料等樣本中的玉米赤（chì）黴烯酮（tóng）時（shí）的樣品前處（chù）理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【試（shì）驗原理】
本產品的測定的基礎是抗原（yuán）抗體反應，玉米赤黴烯酮單克隆抗體連接在柱內凝膠上，樣品（pǐn）中的玉米赤黴烯酮經過提取、過濾、稀釋，然後將樣品提取液緩慢的（de）通過玉米赤黴烯酮免疫親和層析（xī）柱，在免疫親和柱內，玉米（mǐ）赤黴烯酮與（yǔ）抗體結合，之（zhī）後洗滌免疫親和柱除去沒有被結合（hé）的其他物質。用甲（jiǎ）醇洗脫玉米赤黴烯（xī）酮，然後注入到分析儀器中用於檢測。
【包裝組成】
根據不同規格，每一個盒中包含5-25支玉（yù）米赤黴烯酮免疫親和層（céng）析柱及1份說（shuō）明書。
【需要（yào）而未提供的設備及（jí）試劑】
設備：
┅┅高速均質器或組織勻漿機（jī）
┅┅粉碎機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移（yí）液器：單道（dào） 100l～1000l
┅┅槽（cáo）紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾（lǜ）紙（zhǐ）（1.5m孔徑）
┅┅50ml漏鬥
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不（bú）同容積的玻璃注射器等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級）
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅pH7.0磷酸鹽緩衝溶液（PBS緩衝液）：稱（chēng）取8.0g氯化（huà）鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水（shuǐ）溶解，然後用（yòng）濃鹽酸調節pH值至7.0，最後用純水稀釋至（zhì）1000mL
【試劑配製】
樣品提取液：配製甲（jiǎ）醇-水（8：2）溶液作為樣品提取液
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及（jí）其製品和飼料
┅┅稱取50g粉碎的樣品於（yú）100mL容量瓶（píng）中，加入5.0g氯化鈉，以樣品提取液定容。
┅┅轉移（yí）至均質杯中，在（zài）均質器上高速攪拌，提取（qǔ）2分鍾；
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過（guò）濾
┅┅取10mL濾液並（bìng）加入40mLPBS緩衝液稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾（lǜ）後液體（tǐ）待測；
┅┅將免疫親和柱連接於10.0mL玻璃注射器下。準確移取（qǔ）10.0mL樣品提取液（yè）注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵（bèng）與玻璃注（zhù）射器連接，調節壓力使溶液以（yǐ）約1滴（dī）/S的流速緩慢通過免疫親和柱，直（zhí）至2~3mL空氣（qì）通過柱體；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和去離子水依（yī）次淋洗柱子1次，流速約為1滴-2滴/S，棄去全（quán）部流出（chū）液，並使（shǐ）2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲（jiǎ）醇洗脫（tuō），流速為1 滴/S，收集全部洗脫液於玻璃試管（guǎn）中，供檢測用。
（二）啤（pí）酒，黃酒（jiǔ）等酒類
┅┅取10mL試樣脫氣（qì）後與90mLPBS緩衝（chōng）液（yè）混勻，用（yòng）玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾（lǜ）後液體待測；
┅┅將免疫（yì）親和柱連接（jiē）於（yú）10.0mL玻（bō）璃注射器（qì）下。準確（què）移取10.0mL樣品提取液（yè）注（zhù）入玻璃（lí）注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使（shǐ）溶液以約1滴/S的流速（sù）緩慢通過免疫親和柱（zhù），直（zhí）至2~3mL空氣（qì）通（tōng）過柱體；
┅┅以10.0mL的PBS溶液和去離子水依次淋洗柱（zhù）子1次，流速約為1滴-2滴/S，棄（qì）去全部流出液（yè），並使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲（jiǎ）醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部（bù）洗脫液於玻璃試管中，供檢（jiǎn）測用。
【結果判定（dìng）】
經免疫親和柱淨化後（hòu），收（shōu）集到的甲醇洗脫液可（kě）直（zhí）接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑（jì）盒進行檢測。收集（jí）到的1ml洗脫液中的玉米赤黴烯酮含量（liàng）相當於1g樣品中（zhōng）玉米赤黴烯酮含（hán）量。
【注意事項】
┅┅玉米赤黴烯酮危害很大，應戴手套操作。
┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱（zhù）。
【貯藏（cáng）條件及保存（cún）期】
貯藏條件：親和（hé）柱可於常溫保存，2-8℃儲存可延（yán）長有效期，不可凍存
保存期：該產品有效期為12個月。
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